许欣*一、培养基的制备2.按物理性状分类液体培养基半固体培养基（琼脂含量0.3~0.8%）固体培养基（琼脂含量1.2~2.0%）3.按成分分类：合成培养基：由化学物质和成分已知的各种物质所组成，可以是无机盐类，或无机盐类加有机物质。天然培养基：化学成分不完全清楚，各批物质的成分很难一致，如蛋白胨、牛肉膏、血液、鸡蛋。第30页，共55页，星期日，2025年，2月5日许欣*一、培养基的制备（二）培养基的主要成分及其作用1.营养物质：碳源、氮源及其它营养物质（蛋白胨、肉浸液、牛肉浸膏、糖类、血液、鸡蛋、动物血清、酵母粉、生长因子、无机盐类）。2.水分：常用蒸馏水。3.凝固物质：琼脂4.抑制剂和指示剂：如胆盐、抗生素、染料等。第31页，共55页，星期日，2025年，2月5日许欣*一、培养基的制备3、制备培养基的一般程序调配、矫正pH、过滤澄清、分装、灭菌、检定、保存七个步骤。高压蒸汽灭菌（121℃、115℃）、流动蒸汽灭菌（100℃）、血清凝固器灭菌（80℃）、水浴低温灭菌（56℃）第32页，共55页，星期日，2025年，2月5日许欣*二、细菌接种方法（二）细菌的接种方法1.平板划线接种法（分离、鉴别）2.斜面接种法（纯培养、转种）3.半固体培养基接种法（观察动力和保存菌种）4.液体培养基接种法（富集培养、生化反应等）5.平板涂布、倾注接种法（药敏、活菌计数等）第33页，共55页，星期日，2025年，2月5日许欣*三、细菌的培养方法1.需氧培养法（常规培养）2.CO2培养法CO2孵箱法（CO2钢瓶）烛缸法（CO2含量约为5％~10％，氧气约16%）化学法（如碳酸氢钠-盐酸法）第34页，共55页，星期日，2025年，2月5日许欣*三、细菌的培养方法3.厌氧培养法液体培养基的培养（凡士林、疱肉、还原剂等）固体培养基的培养（厌氧罐培养法，厌氧气袋法，厌氧培养箱法，气体喷射培养法（或称转管法））第35页，共55页，星期日，2025年，2月5日许欣*四、细菌的生长现象（一）细菌在固体培养基上的生长现象菌落形状、大小、表面性状、边缘情况、颜色、透明度、质地、粘度、乳化性。血平板(α溶血、β溶血、γ、双环)卵黄琼脂(卵磷脂酶和脂酶：沉淀环和“珍珠包膜”)蛋白水解(清晰的环)色素(水溶性，如绿脓色素、荧光色素等，脂溶性色素，如金黄色葡萄球菌的金黄色菌落)第36页，共55页，星期日，2025年，2月5日许欣*四、细菌的生长现象气味（假单胞菌属：葡萄汁气味；变形杆菌：巧克力烧焦的臭味；链球菌：霉臭；梭菌：粪臭、腐败味；产黑色素类杆菌属细菌：辛辣味）（二）细菌在液体培养基中的生长现象18h～24h，包括：发育程度、浑浊度、沉淀、液体表面性状、其它（色素、气味、产酸、气体）（三）细菌在半固体培养基中的生长现象动力观察第37页，共55页，星期日，2025年，2月5日许欣*第四节细菌的生化反应检查法一、糖类代谢试验1.糖(醇)发酵试验糖类是作为碳源和能量来源提供细菌合成菌体成分必需的原料，由于细菌各自具有不同的酶系统，故对糖(醇)类的分解能力不尽相同。酚红、溴麝香草酚蓝、溴甲酚紫和酸性复红等指示剂液体、半固体、固体培养基双糖(或三糖)高层斜面第38页，共55页，星期日，2025年，2月5日许欣*一、糖类代谢试验2.甲基红（MR）试验分解葡萄糖→丙酮酸→乳酸、乙酸、甲酸→pH4.5以下→加入甲基红指示剂→红色。3.伏普(Voges-Proskauer)试验(V-P试验)葡萄糖代谢→中性最终产物乙酰甲基甲醇。葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇→碱性溶液空气氧化→二乙酰（丁二酮）→加入胍基（如肌酸或肌酐、α-萘酚等）→红色化合物。第39页，共55页，星期日，2025年，2月5日关于细菌的检验技术许欣*第1页，共55页，星期日，2025年，2月5日许欣*第一节样本的采集与送检在公共卫生及预防医学领域所涉及的细菌学检验样本种类繁多，包括来自食品、化妆品、涉水产品、消毒及卫生用品、环境及物品（水、土壤、空气，各种物品）、正常人体及临床等的样本。第2页，共55页，星期日，2025年，2月5日许欣*一、临床样本的采集与送检（一）血及骨髓样本的采集1.采样时间：发热期、用药之前、病情发展2.采样部位及频率：多部位、高频率3.样本采集的量：成人血量10ml，婴儿1ml～2ml，儿童3ml～5ml；当怀疑为真菌感染时，应采集双份量，分别作双相培养(37℃/28℃)。骨髓1ml～2ml。