实验名称蛋白质的定量测定（Folin-酚试剂法）
(Titleof
Experimetn)
实验日期实验地点
XXXXXXXX
(Dateof(
LabNo.)
Experiment)
合作者XXXX指导老师XXXX
(Partner)(Instructor)
总分教师签名批改日期
(TotalScore)(Signature)(Date)
一、实验预习
1.0实验目的
?初步了解各种蛋白质含量测定的常用方法。
?掌握Folin-酚试剂法测定蛋白质含量的原理及熟悉和掌握实验操作技术。
?掌握用excel制作标准曲线和通过标准曲线及标准管方法求样品溶液中待测定物
质含量。
1.1实验原理
1.1.1总体概述
Folin-酚试剂法是经过科学家改进的测定蛋白质含量的方法，Folin首创这种
方法：利用蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基（酚基）还原酚试剂（磷钨酸-磷钼酸）
起蓝色反应。而后，Lowry对此法进行了改进，先于标本中加碱性铜试剂，再与酚试剂
反应，提高了灵敏度，灵敏度的范围为：?，故使得实验的精确度大大提高，
20250g
但同时也存在着干扰物质多、费时、操作严格计时等问题。
1.1.2双缩脲反应
在碱性溶液中，双缩脲（HNOC?NH?CONH）能和Cu2?作用，发生配位
22
反应，形成紫色或紫红色的络合物，即为双缩脲反应。
注：文档可能无法思考全面，请浏览后下载，供参考。
由于蛋白质的肽键结构与双缩脲结构相似，故在碱性溶液中，蛋白质的分子中
肽键能和碱性铜试剂中的Cu2?作用，生成紫红色的蛋白质-Cu2?复合物。对于蛋白质的
测定来说，这一步是基础，这也是Folin-酚法的基础原理。
1.1.3Folin-酚显色反应
Folin-酚试剂在碱性条件下极不稳定，其磷钼酸盐-磷钨酸盐易背酚类化合物
还原而呈现蓝色。酪氨酸（Tyr）含有酚羟基，故蛋白质-Cu2?复合物含有的酪氨酸或色
氨酸残基还原酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸，生成蓝色的化合物。
在一定的浓度范围内，蓝色的深浅与蛋白质的浓度呈线性关系。故可以利用
述两种反应通过分光光度法测定待测样品的蛋白质含量。
1.1.4分光光度法测定样品的蛋白质的含量
本实验以上述两个反应原理为基础，再通过设置空白对照组，标准管中设置蛋
0.2mL0.4mL0.6mL0.8mL
白标准液的一系列浓度梯度（，，，）通过分光光度计测定
吸光度，从而获取标准曲线，样品管通过测定的吸光度值，在标准曲线中找到较为准确
对应的含量。
1.2实验材料
1.2.1实验样品
①血清稀释液（正常人血清稀释300倍）
1.2.2实验试剂
①200mg/ml牛血清白蛋白标准液（BSA）；
②碱性硫酸铜溶液（组成：碱溶液与硫酸铜溶液按50:1混合而成，使
用时该溶液必须新鲜配制，当日有效）；
③Folin-酚试剂（配制过程较为复杂）
注：此次