中文摘要
环状RNAmmu_circ_0001083调控牛肠道病毒HY12复制的机制研究
牛肠道病毒（bovineenterovirus，BEV）属于小RNA病毒科肠道病毒属中的成员，
它所引起的感染临床上以消化系统、呼吸系统和神经系统症状为主要特征，给养牛业
带来了较为严重的经济风险。环状RNA（circRNA）是一类特殊的呈闭合环状结构的
非编码RNA，参与多种生物学过程，如细胞增殖、分化和凋亡，同时在多种疾病的发
生中发挥重要的作用，也是潜在的生物标志物和治疗靶点。为探索circRNA对牛肠道
病毒复制的影响，本研究对肠道病毒HY12毒株感染MC38细胞的circRNA差异表达进
行了组学测定与分析，同时选择差异显著上调的circRNAmmu_circ_0001083为研究对
象，探讨其与HY12病毒感染之间的关联以及调控病毒复制的机制。
应用从HY12肠道病毒感染和未感染的MC38细胞（小鼠结肠癌细胞系）提取的RN
A，通过组学测定与分析，确定病毒感染细胞的circRNA差异表达概况，结果发现MC
38细胞在HY12病毒感染后有570个circRNA表达水平上调，381个circRNA表达水平下
调。为探索与确证circRNA对病毒复制的影响，本研究选择差异显著上调的circRNA
mmu_circ_0001083为研究对象，探讨其与HY12感染之间的关联以及对病毒复制的影响。
利用收敛/分散引物确证mmu_circ_0001083具备环状结构后，使用RT-qPCR等方法确
定不同感染复数（MultiplicityofInfection，MOI）HY12病毒感染MC38细胞及感染后
的不同时间点的mmu_circ_0001083的表达，结果证实HY12病毒感染细胞后，宿主环
状RNAmmu_circ_0001083的表达显著上升，且其表达水平呈现病毒剂量与时间依赖性。
同时，通过敲低或过表达MC38细胞内mmu_circ_0001083的表达水平，应用RT-qPC
R、WesternBlot和TCID50等方法确定病毒mRNA和蛋白水平和病毒滴度，结果显示，
与对照组MC38细胞相比，mmu_circ_0001083敲低MC38细胞感染HY12病毒后，病毒
结构蛋白表达减少，病毒滴度显著降低。相反，过表达环状RNAmmu_circ_0001083的
MC38细胞感染HY12病毒后，病毒结构蛋白基因表达增加，病毒滴度明显升高，表明
宿主环状RNAmmu_circ_0001083的表达上调与HY12病毒感染复制呈显著正相关，即m
mu_circ_0001083对HY12的复制起到了正向调控的作用。
为了进一步探究mmu_circ_0001083调控HY12复制的机制，首先应用亚细胞定位
技术及CPTA蛋白编码潜力分析，初步预测mmu_circ_0001083调控HY12复制的途径。
结果显示mmu_circ_0001083主要定位于细胞质中，且不具备编码蛋白的潜力。据此推
断mmu_circ_0001083可能通过发挥miRNA海绵作用影响病毒复制。进一步使用miRan
da预测软件分析与mmu_circ_0001083潜在直接互作的微小RNA（microRNA，miRN
A），选择与mmu_circ_0001083结合潜力最高的mmu-miR-362-5p作为研究对象，研究
mmu_circ_0001083是否可以吸附mmu-miR-362-5p。通过RNApulldown和双荧光素酶
报告基因技术确定出mmu_circ_0001083与mmu-miR-362-5p存在特异性结合后，利用
TargetScan、MiRDB网站预测与mmu-miR-362-5p互作的靶基因，选择与mmu-miR-362
-5p具有最高结合潜力且参与细胞凋亡信号通路的Plagl2作为靶基因进行后续研究。
通过敲降mmu_circ_0001083或过表达mmu-miR-362-5p并使用RT-qPCR和Wester
nBlot的方法，检测细胞感染HY12病毒后Plagl2及HY12病毒在mRNA水平和蛋白水
平上表达，探讨mmu_circ_0001083是否通过竞争性吸附mmu-miR-362-5p，调控下游
靶基因Plagl2的表达水平从而促进了