蛋白质类药物的含量测定
职业教育医学生物技术专业教学资源库蛋白质的定量是基于测定总有机氮。但某些物质又含有大量的非蛋白氮化合物，必须把蛋白质提出来，分别测总氮及非蛋白氮就得到纯蛋白氮。蛋白质的含量一般是按照总氮量乘上一个合适的蛋白质换算系数来求得的。测出凯氏定氮法样品中的含氮量，再乘以换算系数6.25，就可计算出样品中的蛋白质含量。（1）凯氏定氮法
职业教育医学生物技术专业教学资源库原理：蛋白质与硫酸和催化剂（硫酸铜、硫酸钾）一同加热消化使蛋白质分解，分解的氨与硫酸生成硫酸铵。将消化液碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用标准硫酸或盐酸滴定。滴定消耗的标准盐酸的物质的量即为NH3的物质的量，通过换算即可得出总氮量。（1）凯氏定氮法
职业教育医学生物技术专业教学资源库蛋白质分子中的酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等残基280nm波长下具有最大光吸收。在一定程度下，蛋白质溶液在280nm的吸光度与其浓度成正比，故可做定量测定。该法测定范围是0.01～0.1mg/mL。（2）紫外吸收法
职业教育医学生物技术专业教学资源库此法鉴别快速，非破坏性，不需要标准品；缺点是准确度较差，干扰物质多，用标准曲线法测定蛋白质含量时，对于那些与标准蛋白中酪氨酸和色氨酸含量差异大的蛋白质，有一定的误差。故该法适用于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。（2）紫外吸收法
职业教育医学生物技术专业教学资源库在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色配合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子质量及氨基酸成分无关，因此被广泛应用。该法测定范围为1～10mg/mL。（3）双缩脲法
职业教育医学生物技术专业教学资源库双缩脲法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速但并不需要十分精确的蛋白质测定。（3）双缩脲法
职业教育医学生物技术专业教学资源库蛋白质与Folin-酚试剂反应后形成的化合物可在750nm波长处测定吸光度，计算蛋白质含量。Folin-酚试剂法是较早发展的一种灵敏的检测方法，最低灵敏度为5μg，通常测定范围为20～250μg。（4）Folin-酚试剂法
职业教育医学生物技术专业教学资源库该法优点是灵敏度高，较双缩脲法高100倍。缺点是费时较长，要精确控制操作时间，标准曲线不是严格的直线形式，且专一性差，干扰物质较多。（4）Folin-酚试剂法
职业教育医学生物技术专业教学资源库考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，在酸性溶液中与蛋白质结合呈现蓝色。染料的最大吸收由465nm变为595nm。在595nm下测定的吸收值A950在一定范围（0.01～1.0mg/mL）内与蛋白质浓度成正比。（5）考马斯亮蓝G-250染色法
职业教育医学生物技术专业教学资源库优点：灵敏度高，比Folin-酚试剂法高4倍左右，最低检测达1~5μg；测定快速、简便，只需加一种试剂；完成一个样品的测定，只需要5min左右；染色稳定，其颜色可以在1h内保持稳定；干扰物质少。缺点：用于不同蛋白质测定时有较大的偏差；仍有干扰，如SDS、Triton-x100等；标准曲线有轻微的非线性。（5）考马斯亮蓝G-250染色法
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