黄酮的提取三种方法
辣木叶中黄酮的提取具体操作流程
1.1材料与试剂
辣木叶，老师提供；芦丁标准品、分析纯无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝，氢氧化钠等。
1.2仪器与设备
KQ-300DE型数控超声波清洗器；电子分析天平；AnkeTDL-5-A离心机；紫外/可见分
光光度计。
1.3辣木叶总黄酮的提取方法
取干燥的辣木叶，粉碎过40目筛。准确称取辣木叶粉1.0g，置于100mL烧杯中，加
入体积分数为80%的乙醇溶液超声提取，提取液离心分离，测定总黄酮的含量。
具体操作流程：辣木叶→干燥→磨粉→过40目筛→超声提取→离心→上清液→测定
总黄酮含量。
1.4总黄酮的测定方法1.4.1芦丁标准曲线的绘制
准确称取干燥至恒重的芦丁标准品20mg，用体积分数为80%的乙醇溶液溶解，定容至
25mL，配制得到质量浓度为0.80mg/mL的芦丁标准溶液。准确吸取新配制的芦丁标准溶液
0、125、250、500、625、750、1500μL于10mL的比色管中，加入体积分数80%的乙醇溶
液至9mL，加入5%的Na-NO2溶液300μL，摇匀，放置6min。加入10%的Al（NO3）3溶液
300μL，摇匀，放置6min，再加入1mol/L的NaOH溶液500μL，摇匀，静置10～15min。
以80%的乙醇溶液为试剂空白作参比液，于510nm波长处测定吸光值。以芦丁浓度（mg/mL）
为横坐标，吸光度值A为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程y=ax-b，R2=x，得线性关系。
1.4.2辣木叶总黄酮含量的测定
准确吸取适量辣木叶黄酮提取液，按照芦丁标准曲线制作方法测定吸光度。由吸光度
根据回归方程计算出原提取液中总黄酮的质量浓度（C），测量得到辣木提取液体积（），
然后计算出辣木叶中总黄酮的提取率。辣木叶中总黄酮提取率（以芦丁计）%=C×VM×100
其中：C为样液经吸光度算出的原提取液中总黄酮的质量浓度（g/mL）；为提取液的总
体积（mL）；M为称取的辣木叶粉质量（mg）。
方法一：乙醇超声提取1.5单因素试验
1.5.1料液比对辣木叶总黄酮提取率的影响准确称取1.0g辣木叶粉5份，分别置于
100mL的烧杯中，加入体积分数80%的乙醇溶液混匀，选择提取温度20℃、提取时间
20min、超声波处理功率150W，分别考察料液比为1∶20、1∶25、1∶30、1∶35和1∶40
（g/mL）对辣木叶总黄酮提取率的影响。提取液于4200r/min下离心20min，取上清液测
定吸光度值，计算总黄酮提取率。
1.5.2提取时间对辣木叶总黄酮提取率的影响准确称取1.0g辣木叶粉5份，分别置
于100mL的烧杯中，加入体积分数80%的乙醇配成料液比1∶30（g/mL）的溶液，选择超
声功率150W、提取温度20℃，分别考察超声处理时间为10、20、30、40和50min对辣木
叶总黄酮提取率的影响。提取液于4200r/min下离心20min，取上清液测定吸光度值，计
算总黄酮提取率。
1.5.3超声功率对辣木叶总黄酮提取率的影响准确称取1.0g辣木叶粉5份，分别置
于100mL的烧杯中，加入体积分数80%的乙醇配成料液比1∶30（g/mL）的溶液，选择提
取时间40min、提取温度20℃，分别考察超声功率为120、150、180、210和240W时对辣
木叶总黄酮提取率的影响。提取液于4200r/min下离心20min，取上清液测定吸光度值，
计算总黄酮提取率。
1.5.4提取温度对辣木叶总黄酮提取率的影响
准确称取1.0g辣木粉5份，分别置于100mL的烧杯中，加入体积分数80%的乙醇配成
料液比1∶30（g/mL）的溶液，选择提取时间40min、提取功率210W，分别考察处理温度
为20、30、40、50和60℃时对辣木叶总黄酮提取率的影响。提取液于4200r/min下离心
20min，取上清液测定吸光度值，计算总黄酮提取率。
1.6辣木叶总黄酮提取响应面优化试验方案设计
试验采用Design-Expert8.0.6.1软件中的Box-Behnkendesign设计原理，以提取温
度、时间、料液比和功率4个因素为自变量，以总黄酮提取率为