实验动物病毒检测ELISA试验中酶结合物工作浓度滴定
1．器材、试剂和操作步骤见酶联免疫吸附试验。
2．以最佳抗原浓度（5～10μg/ml）包被96孔可拆式（1X12或2X8）聚苯乙烯板。
3．用于酶结合物工作浓度滴定的阳性血清，从1：40开始作连续倍比稀释。
4．选择阳性血清在最高稀释度时吸光值（A）达1.0左右的酶结合物稀释度，作为ELISA检测法酶结合物工作浓度（举例：见表1）。根据滴定结果，酶结合物工作浓度为1：2000。
5．以同样的方式包被抗原，选用1：40的阴性血清和1：2000稀释的酶结合物，进一步验证酶结合物工作浓度。如阴性血清的吸光值（A）≤0.1，则说明1：2000稀释的酶结合物时可用的，否则需要重新滴定。
表1酶结合物工作浓度滴定（举例）
抗体
浓度
酶结合物
1：500
1：1000
1：2000
1：4000
1：8000
1：16000
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
+
-
+
-
+
-
+
-
+
-
+
-
1：40
2.230
0.020
1.860
0.016
1.660
0.012
0.850
0.009
0.640
0.007
0.474
0.005
1：80
2.100
0.012
1.760
0.010
1.400
0.010
0.740
0.006
0.510
0.006
0.405
0.004
1：160
1.850
0.011
1.400
0.010
1.200
0.007
0.700
0.005
0.450
0.005
0.382
0.004
1：320
1.450
0.010
1.200
0.009
1.000
0.006
0.680
0.005
0.400
0.004
0.371
0.003
1；640
0.840
0.009
0.750
0.008
0.800
0.005
0.600
0.004
0.380
0.003
0.350
0.002
1：1280
0.780
0.010
0.640
0.008
0.600
0.004
0.480
0.004
0.250
0.002
0.075
0.001
1：2560
0.600
0.011
0.550
0.007
0.510
0.004
0.350
0.003
0.150
0.002
0.035
0.001
1；5120
0.380
0.009
0.350
0.006
0.250
0.003
0.200
0.003
0.100
0.002
0.020
0.001