ICS65.020.01
CCSB16
GXAS
团体标准
T/GXASXXXX—2024
马尾松组培苗松材线虫病抗性室内鉴定
技术规程
Technicalcodeofpracticeforindooridentificationofresistancetopinewiltdisease
intissuecultureseedlingsofPinusmassonianaLamb
（征求意见稿）
在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上。
2024-XX-XX发布2024-XX-XX实施
广西标准化协会??发布
T/GXASXXXX—2024
马尾松组培苗松材线虫病抗性室内鉴定
技术规程
1范围
本文件界定了马尾松（PinusmassonianaLamb）组培苗松材线虫病抗性室内鉴定与评价涉及的术
语和定义，规定了松材线虫病抗性室内鉴定与评价技术中接种体制备、室内抗性鉴定、抗性评价等阶段
的操作指示,描述了鉴定过程信息的追溯方法。
本文件适用于室内环境下对马尾松组培苗松材线虫病抗性的鉴定与评价。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，
仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本
文件。
GB/T23476松材线虫病检疫技术规程
GB/T35342松材线虫分子检测鉴定技术规程
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
混合株系mixedstrain
包含一定数量的能覆盖病害发生地区松材线虫病生态分布区域的致病性松材线虫混合在一起的株
系。
室内鉴定indoorappraisal
在人工控制温度、湿度及光照条件的培养室内，鉴定马尾松组培苗在人工接种混合株系松材线虫病
后的抵抗水平。
抗性评价evaluationofdiseaseresistance
根据接种混合株系松材线虫病后马尾松组培苗病害反应程度和抗病性等级的描述。
4接种体制备
线虫分离
混合株系线虫的来源分离方法如下：
a)在病害发生地选取由松材线虫致死的当年枯死树，分别在树杆或粗枝上取30cm左右的木段用
于松材线虫取样；
b)选取木段中5cm大小的木块用自来水洗净，99.9％酒精液冲淋1遍，灭菌水洗3次后切碎；
c)按照GB/T23476中的贝曼漏斗法分离线虫，并使用螺口指形瓶收集，同一个疫区的样品中收
集到的松材线虫群体称为一个分离株系；
d)不同疫区的松材线虫株系按照“地理来源—年份—序列号”进行命名。
线虫鉴定
将分离株系的松材线虫按照GB/T23476的规定进行镜检、形态鉴定和分子生物学鉴定。
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T/GXASXXXX—2024
线虫保存
将鉴定后的分离株系松材线虫放在0.1％硫酸链霉素溶液中表面消毒5min，使用灭菌水洗3次后，
在超净工作台中将其接种到PDA平板培养基上生长良好的灰葡萄霉菌丝中，然后置于恒温培养箱中在
25℃下进行培养保存备用。
线虫筛选
对分离株系线虫群体的筛选方法如下：
a)