第119页，共163页，星期日，2025年，2月5日刺孔点第120页，共163页，星期日，2025年，2月5日7．先弃去前端1cm处，然后用接种镐快速移取黄豆粒大小的菌种入待接试管斜面培养基中央。
第87页，共163页，星期日，2025年，2月5日8．灼烧试管口，并将棉塞在火焰上迅速过一下然后塞上。9．用接种镐挑持住母种管，另一只手换待接管，重复上述操作。10．收拾台面。11.贴标签第88页，共163页，星期日，2025年，2月5日特点简便，易成功保持原菌种性状重复多易退化不适于耳类1.组织分离：采用食用菌子实体或菌核、菌索的任何一部分组织培养成纯菌丝体的方法。组织PDA次生菌丝培养（一）分离法第89页，共163页，星期日，2025年，2月5日根据分离材料的不同，组织分离法可分为子实体分离法、菌核分离法以及菌索分离法。（1）子实体分离法采用子实体的任何部分如菌盖、菌柄、菌褶、菌肉进行组织培养，从而形成纯菌丝体的方法。第90页，共163页，星期日，2025年，2月5日a伞菌组织分离法①种菇的选择：头潮菇、外观典型、大小适中、菌肉肥厚、颜色正常、尚未散孢，无病虫害、长至七八分熟的优质单朵菇做种菇。②种菇消毒：切取菇体基部，用75%的酒精溶液浸泡0.5-1min，再用无菌水冲洗2-3次。③切块接种：纵剖（撕）菇体，尖头镊取柄盖交界处绿豆粒大的组织放入新斜面中部第91页，共163页，星期日，2025年，2月5日④培养纯化：适温下培养2-4天，可看到组织块上长出白色绒毛状菌丝体，移接到新的培养基上再经过5-7天适温培养，长满试管后即为纯菌丝体。⑤出菇试验：将分离得到的试管种扩大繁殖，并移接培养成原种、栽培种,做出菇试验,选出出菇好、产量高、质量好的，即可作栽培生产用种。第92页，共163页，星期日，2025年，2月5日b胶质菌类组织分离法：①一种方法是将耳片反复用无菌水冲洗，切成0.5cm，小块移入培养基，于28℃下进行培养；②另一种方法是剖取尚未展开耳片的耳基团内的组织块进行分离。第93页，共163页，星期日，2025年，2月5日（2）菌核分离法：一些药用菌如茯苓、猪苓、雷丸都有菌核。进行组织分离时，采用含浆汁多的菌核。在无菌的条件之下，将菌核剖开，于菌核的附近，剖取蚕豆大小的菌核组织块移入斜面培养基上，在26-30℃下培养。第94页，共163页，星期日，2025年，2月5日（3）菌索分离法：从菌索中分离培养得到纯菌丝体的方法。.菌索分离第95页，共163页，星期日，2025年，2月5日2、木腐菌基内菌丝分离①把分离用菇木的部分或全部的表面在火焰上轻燎。②取小刀在火焰上灭菌，对准菇木上菇柄（耳基）的着生位置切成两半。③确定欲分离菌丝在菇木上的位置，再次用火焰灭菌过的小刀，在欲分离部位刻划数个井字。④用火焰灭过菌的接种钩，钩取一小块木屑（绿豆大小或更小）移接于斜面培养基。⑤接种后将试管置于25—27℃下培养，促使其恢复。近风干的种木内菌丝常处于休眠状态。接种后，种木吸湿，菌丝逐渐恢复生长。如果短期时间内分离物未曾发，则可保留至4周后，再断定分离是否成功。第96页，共163页，星期日，2025年，2月5日3.孢子分离(有性繁殖）
孢子分离主要是指利用子实体上产生的成熟有性孢子分离培养获得纯菌种的方法。分为多孢分离与单孢分离两种。孢子
特点菌龄小
生命力强
变异率高孢子
分离法难度较大单孢分离多孢分离较简易第97页，共163页，星期日，2025年，2月5日多孢分离概念使许多孢子在同一培养基上，
萌发后自由交配成次生菌丝的方法步骤种菇消毒采收孢子接种孢子整菇插种法
钩悬法孢子印法单孢分离
的菌落第98页，共163页，星期日，2025年，2月5日1.种菇
消毒菌柄去2/3苞被有：75%酒精棉球擦0.25%新洁尔灭浸2~3min
无菌纱布吸干表面水分无第99页，共163页，星期日，2025年，2月5日2.采收孢子整菇
插种法种菇插在孢子收集器中
使孢子散落于培养皿内的方法用
前
灭
菌25℃、24h现孢子粉
取出分离材料
培养皿盖严第100页，共163页，星期日，2025年，2月5日钩悬法生产上采集木耳、银耳的孢子常采用此法。25℃、24h现孢子粉
取出分离材料第101页，共163页，星期日，2025年，2月5日孢子印法取成熟的伞菌或胶质的子实体，经表面消毒，切去菌柄，菌褶向下，放置于灭过菌的有色纸上（红、黑、蓝、白），用通气钟罩上，静置一天（20-24℃），孢子落在纸上，形成孢子印，再从中挑取少量孢子转入试管培养基上培养。第