布洛芬片的含量测定方案
一、前言
布洛芬又名芬必得，是一种非甾体类解热镇痛抗炎药。本品通过抑制环氧化酶，使合成的前列腺素减少，产生镇痛、抗炎作用；通过下丘脑体温调节中枢而起解热作用。临床用于痛风、降低高尿酸和退烧等作用。关于“布洛芬片”的相关资料可以在网站查阅，布洛芬治疗痛风是通过消炎、镇痛、并不能纠正高尿酸血症。2-(-4-异丁基苯基)丙酸是布洛芬的化学名称，也称异丁洛芬，α-甲基-4-(2-甲基丙基)苯乙酸，异丁苯丙酸。按照国家药检标准布洛芬片每片含布洛芬0.1克，其辅料为：羟丙纤维素、预胶化淀粉、糊精、淀粉、二氧化硅、硬脂酸镁、羧甲淀粉钠、蔗糖、滑石粉、明胶、硅油、虫白蜡。药品的含量是药品质量标准中的一个重要项目，是评定药品的主要指标之一。布洛芬片中发挥药效的成分主要是布洛芬，其含量不合格属于劣药，是不允许生产、销售使用的。可见含量是决定该药品是否合格的重要因素。因此在设计布洛芬片含量测定方法时，应根据布洛芬的结构特点，具有的理化性质、布洛芬片剂型特点、处方等方面综合考虑。实验中为测定布洛芬的含量，参考《中国药典》(2020年版)四部、二部，建立了测试布洛芬的高效液相色谱法。
图1:布洛芬分子式
二、设计依据
主要参考《中国药典》(2020年版)二部正文、四部通则中高效液相色谱法(中国药典通则0512)测定来设计本方案。《中国药典》规定，布洛芬片的含量测定包括溶液制备、色谱条件和系统适用性实验，测定方法。色谱条件是用C?8柱(4.6mm*250nm,5μm);用0.01mol/1磷酸溶液(含0.3%H?PO?pH=2.5)-乙腈=60:40为流动相；检测波长为272nm;柱温为30℃,其中按布洛芬峰计算理论板数应不低于2500。
三、设计方案1.仪器与试药
(1)仪器及耗材
CQ超声波清洗器、酸度计、高效液相色谱仪(EnvironmentalExpress
SPE-Express)、超声仪、电子分析天平、10ml、50ml和100ml容量瓶、0.45μm滤膜、移液管、洗耳球、胶头滴管、烧杯、玻璃棒、试剂瓶、滤纸。
(2)试药
布洛芬片(每片0.2g,中美天津史克制药),布洛芬对照品(中国食品药品检定研究院),乙腈(色谱纯),甲醇(色谱纯，天津四友生物有限公司),磷酸(分析纯),超纯水。
2.色谱条件
(1)色谱柱：C?8柱(AgilentEclipse)。
(2)流动相：0.01mol/1磷酸溶液(含0.3%H?P0?pH=2.5)-乙腈=60:40。
(3)检测波长：272nm。
(4)柱温：30℃。
(5)进样量：10μl。
(6)流速：1.1ml/min。
(7)空白干扰试验
按照布洛芬片的处方比例和工艺，除了不加布洛芬，其他都同供试品的制备，制成不含布洛芬的阴性供试品溶液，注入色谱仪进行检测，在相同的保留时间处没有出现布洛芬色谱峰峰值，表明辅料对测定无干扰，做好记录。
3.供试品溶液的制备
取布洛芬片20片(如果为糖衣片，去除糖衣),精密称定，计算平均片重。药片倒入研钵中充分研细，精密称取约相当于布洛芬0.2g的片粉，放入50ml的量瓶中，加甲醇2ml超声10min使溶解，加甲醇稀释至刻度，充分摇匀，用0.45μm滤膜滤过，用2ml移液管准确移取续滤溶液2ml,置于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度线，摇匀，作为供试品溶液。
4.对照品溶液的制备
取经五氧化二磷干燥器内减压干燥至恒重的布洛芬对照品约40mg,精密称定，置50ml的量瓶中，加入的甲醇溶解，稀释至刻度后摇匀，制成1ml中含有0.80mg的溶液，作为对照品溶液。
5.专属性试验
甲醇清洗微量注射器后，用微量注射器分别精密吸取供试品溶液、布洛芬对照品溶液各10μl,分别注入高效液相色谱仪中，按照上述的色谱条件进行测定，记录色谱图，布洛芬与相邻杂质峰分离度大于1.5,则表明本方法专属性良好。
6.线性关系考察
精密吸取“4.对照品溶液的制备”项下、布洛芬对照品贮备液溶液，置于50m量瓶中，加入甲醇15ml,超声10min使其溶解，再加入甲醇至刻度，充分摇匀。再精密量取该溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml、7.0ml,分别置于10ml的容量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，充分摇匀，分别进样10μl,记录色谱图。再按“2.色谱条件”项下的色谱条件注入液相色谱仪中进行测定，记录各溶液色谱峰峰面积，以峰面积(A)为纵坐标，布洛芬对照品溶液浓度(C)为